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抑菌剂在开放组培中的使用及效果研究一

抑菌剂在开放组培中的使用及效果研究一

1材料与方法1.1供试材料

1.1.1供试药剂50%多菌灵可湿性粉剂、70%代森猛锌可湿性粉剂、yl一1、57.6%冠菌清干粒剂、50%扑海因悬浮剂、75%百菌清可湿性粉剂.

1.1.2供试菌种微球菌(micrococcus)、葡萄球菌(staphylococcus)、棕曲霉、黑曲霉、黑青霉、杜氏青霉都是从被污染的培养植物上分离纯化获得.

1.1.3培养基yeb培养基;pda培养基.

1.2试验方法

1.2.1污染细菌鉴定革兰氏染色法初步鉴定细菌.

1.2.2抑菌强度测定无菌水稀释药剂成1000mg/l.细菌取0.2ml对数期菌悬液(真菌取0.2ml孢子菌悬液(106个/ml))与20mlyeb(真菌pda)培养基混匀倒平板.凝固后每一平板置2个牛津杯(直径8mm),一杯加o.2ml药剂,另一杯以无菌水作对照,置于28℃温箱培养,葡萄球菌培养24h、微球菌和真菌培养48h后,取出测抑菌圈直径.

1.2.3细菌最低抑菌浓度测定用无菌水稀释药剂成2000mg/l原液,然后按1:2,1:4,l:8.二稀释至15.625mg/l,余下均同1.2.2.

1.2.4菌丝生长抑制实验用无菌水配制成106个/ml孢子悬浮液,分别取0.2ml孢子悬浮液与20mlpda培养基混匀倒平板,28℃温箱遮光培养48h后备用.用无菌水稀释药剂成2000mg/l原液,然后配制成1000,500,250……0.9765625mg/l的含药培养基,对照为不加药的培养基.用打孔器(直径7mm)从备用平板中打取菌饼,菌丝面朝下接种于含药培养基中央,每平板加一个菌饼,3次重复,28℃温箱遮光培养,每2d取出测量菌落直径.

生长抑制率(%)={(对照菌落直径一菌饼直径)一(处理菌落直径一菌饼直径)/(对照菌落直径一菌饼直径)}*100%

1.2.5袍子萌发抑制试验将孢子接种于液体pda中,于28℃、130rad/min摇床上培养24h,双层纱布过滤后用无菌水调制成104个/ml备用.用无菌水稀释药剂成2000mg/l的原液,然后配制成1000、250、62.5……0.9765625mg/l的含药培养基.分别取2ml孢子悬浮液与不同浓度的含药培养基混匀,3次重复,28℃培养,72h后镜检计算孢子萌发抑制率.

孢子萌发抑制率(%)={(对照萌发率一处理萌发率)/对照萌发率}x100%

1.2.6对植物生长抑制试验与开放组培初探用无菌水配制药剂成2000mg/l原液,4000rad/min离心10min,上清液用孔径20nm的滤膜过滤备用.将滤好的原液与培养基混合配制成1000、250、62.5mg/l的含药培养基.取健壮的马铃薯试管苗剪成小段,接种于上述含药培养基,对照为不加药的培养基,每梯度6瓶,每瓶10株,其中3瓶正常放置,3od后观察马铃薯生长情况,另外3瓶开口放置,20d后观察马铃薯的污染情况.

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